绘制标准曲线通常遵循以下步骤:
准备标准溶液
选择一系列标准溶液的浓度,这些浓度应覆盖待测样品的可能浓度范围。
使用容量瓶准确配制不同浓度的标准溶液。
测量吸光度
使用紫外可见分光光度计进行测量。
测量时,比色皿需用去离子水润洗,并确保溶液不低于比色皿的三分之二处。
进行空白对照,确保吸光度读数为0。
按照浓度从小到大的顺序进行测定,记录每个浓度对应的吸光度值。
绘制标准曲线
在坐标纸上绘制标准曲线,横轴表示浓度,纵轴表示吸光度。
将各点连线,理想情况下曲线应通过原点,符合Lambert-Beer定律。
如果数据点不完全在一条直线上,可以通过原点绘制一条直线,使尽可能多的点在线上,并将不在直线上的点均匀分布在直线两侧。
评估拟合度
标准曲线绘制完毕后,需要评估其拟合度,通常通过计算相关系数(R^2)来判断。
R^2值越接近1,表示拟合度越好。
记录和报告
在坐标纸上注明实验项目的名称、使用的仪器型号、滤光片号码或单色光波长以及绘制的日期和室温。
标准曲线只能用于在相同条件下对相同物质进行测定。
注意事项
标准曲线应在稳定的环境条件下绘制,环境变化如仪器移动、试剂更换或室温明显改变时需重新绘制标准曲线。
确保测量过程中仪器稳定,多次测量取平均值以减少误差。
以上步骤概述了绘制标准曲线的基本流程。