ELISA（酶联免疫吸附实验，Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）是一种 利用抗原抗体特异性结合的特性，通过酶高效催化其底物显色来检测生物体液中一些分子的有无或浓度的分析方法。该方法具有高灵敏度和特异性，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
ELISA的基本原理包括以下几个步骤：
固相载体：
将抗原或抗体固定在微孔板或其他固相载体上，保持其免疫活性。
加样与孵育：
向固相载体中加入待测样本（如血清、血浆等），使其与固定的生物分子发生反应。
酶标记抗体：
加入酶标记的特异性抗体或抗原，与固相上的目标分子结合。
显色：
加入合适的底物，酶催化底物产生有色产物，通过检测光信号的大小来定量分析样品中的成分。
结果判定：
通过显色的深浅或光信号的强度来判定样本中目标分子的浓度或有无。
ELISA有多种方法类型，包括直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA和竞争ELISA等，分别适用于不同的检测需求。
ELISA实验流程图：
1. 样品准备处理：取所需样品体积，如有必要，进行适当稀释以符合测试范围。
2. 加样与孵育：在微孔板中加入50μL样品，并在适宜的温度下孵育一段时间。
3. 洗涤：去除未结合的反应物。
4. 加入酶标二抗：加入酶标记的抗抗体，与固相上的第一抗体反应。
5. 加入底物：加入显色底物，酶催化显色。
6. 终止反应：加入终止液，停止反应。
7. 检测与结果判定：通过酶标仪读取光信号强度，进行定量分析。
ELISA法具有以下优点：
高灵敏度：能够检测到极低浓度的抗原或抗体。
高特异性：通过抗原抗体特异性结合，减少非特异性反应。
操作简便：实验步骤少，易于自动化和标准化。
适用性广：适用于检测各种生物分子，如抗体、激素、蛋白质和病原体等。
ELISA法在多种生物医学研究和临床诊断中发挥着重要作用，例如在艾滋病、传染病、自身免疫性疾病和肿瘤标志物检测等领域。